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实验室常用溶剂的配制

发布时间:

实验室常用溶液配制(希望对大家有帮助) 作者: Eric6007 (站内联系 TA) 一. 常用贮液与溶液 发布: 2006-04-26

1mol/L 亚精胺 (Spermidine) : 溶解 2.55g 亚精胺于足量的水中, 使终体积为 10ml。 分装成小份贮存于-20℃。 1mol/L 精胺(Spermine):溶解 3.48g 精胺于足量的水中,使终体积为 10ml。分装成小份贮存于-20℃。 10mol/L 乙酸胺(ammonium acetate):将 77.1g 乙酸胺溶解于水中,加水定容至 1L 后,用 0.22um 孔径 的滤膜过滤除菌。 10mg/ml 牛血清蛋白(BSA):加 100mg 的牛血清蛋白(组分 V 或分子生物学试剂级,无 DNA 酶)于 9.5ml 水中(为减少变性, 须将蛋白加入水中,而不是将水加入蛋白),盖好盖后,轻轻摇动,直至牛血清蛋白完全溶解为止。不要 涡旋混合。加水定容到 10ml,然后分装成小份贮存于-20℃。 1mol/L 二硫苏糖醇 (DTT) : 在二硫苏糖醇 5g 的原装瓶中加 32.4ml 水, 分成小份贮存于-20℃。 或转移 100mg 的二硫苏糖醇 至微量离心管,加 0.65ml 的水配制成 1mol/L 二硫苏糖醇溶液。 8mol/L 乙酸钾(potassium acetate):溶解 78.5g 乙酸钾于足量的水中,加水定容到 100ml。 1mol/L 氯化钾(KCl):溶解 7.46g 氯化钾于足量的水中,加水定容到 100ml。 3mol/L 乙酸钠 (sodium acetate) : 溶解 40.8g 的三水乙酸钠于约 90ml 水中, 用冰乙酸调溶液的 pH 至 5.2, 再加水定容到 100ml。 0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的 Na2EDTA 和 NaOH 溶液 (0.5mol/L) , 混合后形成 EDTA 的三钠盐。 或称取 186.1g 的 Na2EDTA?2H2O 和 20g 的 NaOH,并溶于水中,定容至 1L。 1mol/L HEPES:将 23.8gHEPES 溶于约 90ml 的水中,用 NaOH 调 pH(6.8-8.2),然后用水定容至 100ml。 1mol/L HCl:加 8.6ml 的浓盐酸至 91.4ml 的水中。 25mg/ml IPGT:溶解 250mg 的 IPGT(异丙基硫代-β -D-半乳糖苷)于 10ml 水中,分成小份贮存于-20℃。 1mol/LMgCl2:溶解 20.3g MgCl2?6H2O 于足量的水中,定容到 100ml。 100mmol/L PMSF:溶解 174mg 的 PMSF(苯甲基磺酰氟)于足量的异丙醇中,定容到 10ml。分成小份并用铝 箔将装液管包裹 或贮存于-20℃。 20mg/ml 蛋白酶 K(proteinase K):将 200mg 的蛋白酶 L 加入到 9.5ml 水中,轻轻摇动,直至蛋白酶 K 完 全溶解。不要涡旋混合。加水定容到 10ml,然后分装成小份贮存于-20℃。 10mg/mlRnase(无 DNase)(DNase-free RNase):溶解 10mg 的胰蛋白 RNA 酶于 1ml 的 10mmol/L 的乙酸 钠水溶液中 (pH 5.0) 。 溶解后于水浴中煮沸 15min, 使 DNA 酶失活。 用 1mol/L 的 Tris-HCl 调 pH 至 7.5, 于-20℃贮存。(配制过程中要戴手套) 5mol/L 氯化钠(NaCl):溶解 29.2g 氯化钠于足量的水中,定容至 100ml。 10N 氢氧化钠(NaOH):溶解 400g 氢氧化钠颗粒于约 0.9L 水的烧杯中(磁力搅拌器搅拌),氢氧化钠完 全溶解后用水定容至 1L。 10%SDS(十二烷基硫酸钠):称取 100gSDS 慢慢转移到约含 0.9L 的水的烧杯中,用磁力搅拌器搅拌直至 完全溶解。用水定容至 1L。 2mol/L 山梨(糖)醇(Sorbitol):溶解 36.4g 山梨(糖)醇于足量水中使终体积为 100ml。

100%三氯乙酸(TCA):在装有 500gTCA 的试剂瓶中加入 100ml 水,用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。(稀 释液应在临用前配制) 2.5% X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β -半乳糖苷):溶解 25mg 的 X-gal 于 1ml 的二甲基甲酰胺(DMF), 用铝箔包裹装液管,贮存于-20℃。 100×Denhardt 试剂(Denhardt’s regent) 成分及终浓度 配制 100ml 溶液各成分的用量 2%聚蔗糖(Ficoll,400 型) 水 2g 2%聚乙烯吡咯烷酮(PVP-40) 2g 2%BSA(组分 V) 2g

加水至总体积为 100ml ,依照上表称取各组分, 溶于水中定容。 过滤除菌及杂质, 分装成小份于-20℃贮存。 10×标准 DNA 连接酶缓冲液(standard DNA ligase buffer)(粘端、平端连接) 成分及终浓度 配制 10ml 溶液各成分的用量 0.5mol/L Tris-HCl:5ml1mol/L 贮液 ,100mmol/L MgCl2:1ml 1mol/L 贮液,100mmol/L DTT:1ml 1mol/L 贮液,2mmol/L ATP: 200ul 100 mmol/L 贮液,5mmol/L 盐酸亚精胺(可选):50ul 1 mmol/L 贮 液,0.5mg/ml BSA(组分 V)(可选):0.5ml 10 mg/mL 贮液 ,水: 2.25ml 将配制好的缓冲液分装成小份,贮存于-20℃ 。 100 mmol/L dNTP 溶液(dNTP solutions) 可以购买到 100mmol/L 纯 dNTPs 贮液,-80℃可贮存至少 6 个月。 10mmol/L dNTP 混合液 成分及终浓度 配制 20ul 溶液各成分的用量 10mmol/L dATP 10mmol/L dCTP 10mmol/L dGTP 10mmol/L dTTP 水 2ul 100 mmol/L dATP 贮液 2ul 100 mmol/L dCTP 贮液 2ul 100 mmol/L dGTP 贮液 2ul 100 mmol/L dTTP 贮液 12ul 20%PEG 8000/2.5M NaCl 成分及终浓度 配制 10ml 溶液各成分的用量 质量浓度为 20%聚乙二醇 2.5mol/L 氯化钠 水 20g 50ml 5 mol/L 氯化钠 或 14.6g 固体氯化钠 补足 100ml 加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中,加水至终体积 100ml,用磁力搅拌器搅拌溶解。 20×SSC 成分及终浓度 配制 1L 溶液各成分的用量 300mmol/L 柠檬酸三钠(二水) 3mol/L 氯化钠 水 88.2g 175.3g 补足 1L 溶解柠檬酸三钠 (二水) 和氯化钠于约 0.9L 水中, 加几滴 10N NaOH 溶液调 pH 为 7.0, 用水补足体积至 1L。

DEPC(焦碳酸二乙酯)处理水 加 100ul DEPC 于 100ml 水中,使 DEPC 的体积分数为 0.1%。在 37℃温浴至少 12h,然后在 15 psi 条件 下高压灭菌 20min,以使残余的 DEPC 失活。DEPC 会与胺起反应,不可用 DEPC 处理 Tris 缓冲液。 甲酰胺(deionized formamide) 直接购买或加 Dowex XG8 混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中,用磁力搅拌器轻轻搅拌 1h,可去除甲酰胺 中的离子。经 Whatman 1 号滤纸过滤除去树脂后分成小份,充氮气于-80℃贮存(防止氧化)。 磷酸缓冲液(phosphate buffer) 按照下表所给定的体积,混合 1 mol/L 的磷酸二氢钠(单碱)和 1mol/L 磷酸氢二钠(双碱)贮液,获得 所需 pH 的磷酸缓冲液。配制 1 mol/L 的磷酸二氢钠(NaH2PO4?H2O)贮液:溶解 138g 于足量水中,使终 体积为 1L;1mol/L 磷酸氢二钠(Na2HPO4)贮液:溶解 142g 于足量水中使终体积为 1L。 1mol/L 磷酸二氢钠(ml) 1mol/L 磷酸氢二钠(ml) 最终 pH 值 877 850 815 775 735 685 625 565 510 450 390 330 280 123 150 185 225 265 315 375 435 490 550 610 670 720 6.0 6.1 6.2 6.3 6.4 6.5 6.6 6.7 6.8

6.9 7.0 7.1 7.2 TE(用于悬浮和贮存 DNA) 成分及终浓度 配制 100ml 溶液各成分的用量 10mmol/L Tris-HCl 1mmol/L EDTA 水 1ml 1mol/L Tris-HCl(pH7.4-8.0,25℃) 200ul 0.5 mol/L EDTA(pH 8.0) 98.8ml Tris 缓冲液(Tris-HCl buffer) 将 121g 的 Tris 碱溶解于约 0.9L 水中,再根据所要求的 pH(25℃下)加一定量的浓盐酸(11.6N),用水 调整终体积至 1L。 浓盐酸的体积(ml) pH 8.6 14 21 28.5 38 46 56 66 71.3 76 8.8 8.6 8.4 8.2 8.0 7.8 7.6 7.4 7.2 二.电泳缓冲液、染料和凝胶加样液 电泳缓冲液 50×Tris-乙酸(TAE)缓冲液 成分及终浓度 配制 1L 溶液各成分的用量 2mol/L Tris 碱 1mol/L 乙酸 100 mmol/L EDTA 水 242g 57.1 ml 的冰乙酸(17.4 mol/L) 200ml 的 0.5 mol/L EDTA(pH 8.0) 9.0

补足 1L 5×Tris-硼酸(TBE)缓冲液 成分及终浓度 配制 1L 溶液各成分的用量 445 mmol/L Tris 碱 445 mmol/L 硼酸盐 10 mmol/L EDTA 水 54g 27.5g 硼酸 20 ml 的 0.5 mol/L EDTA(pH 8.0) 补足 1L 染料 1%溴酚蓝(bromophenol blue) 加 1g 水溶性钠型溴酚蓝于 100ml 水中,搅拌或涡旋混合直到完全溶解。 1%二甲苯青 FF(xylene cyanole FF) 溶解 1g 二甲苯青 FF 于足量水中,定容到 100ml。 10mg/ml 的溴化乙锭(ethidium bromide) 小心称取 1g 溴化乙锭,转移到广口瓶中,加 100ml 水,用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。用铝箔包裹装液 管,于 4℃贮存。 凝胶上样液(gel loading solutions) 6×碱性凝胶上样液(室温贮存) 成分及终浓度 配制 10ml 溶液各成分用量 0.3 N 氢氧化钠 6 mmol/L EDTA 18%聚蔗糖(400 型) 0.15%溴甲酚绿 0.25%二甲苯青 FF 水 1.8g 15mg 25mg 补足到 10ml 6×聚蔗糖凝胶上样液(室温贮存) 成分及终浓度 配制 10ml 溶液各成分用量 0.15%溴酚蓝 0.15%二甲苯青 FF 5 mmol/L EDTA 15%聚蔗糖(400 型) 水 1.5ml 1%溴酚蓝 1.5ml 1%二甲苯青 FF 100ul 0.5mol/L EDTA(pH8.0) 1.5g 补足到 10ml 6×溴酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液(室温贮存) 300ul 10N 氢氧化钠 120ul 0.5mol/L EDTA(pH8.0)

成分及终浓度 配制 10ml 溶液各成分用量 0.25%溴酚蓝 0.25%二甲苯青 FF 15%聚蔗糖(400 型) 水 1.5g 补足到 10ml 6×甘油凝胶上样液(4℃贮存) 成分及终浓度 配制 10ml 溶液各成分用量 0.15%溴酚蓝 0.15%二甲苯青 FF 5 mmol/L EDTA 50%甘油 水 1.5ml 1%溴酚蓝 1.5ml 1%二甲苯青 FF 100ul 0.5mol/L EDTA(pH8.0) 3ml 3.9ml 6×蔗糖凝胶上样液(室温贮存) 成分及终浓度 配制 10ml 溶液各成分用量 0.15%溴酚蓝 0.15%二甲苯青 FF 5 mmol/L EDTA 40%聚蔗糖 水 1.5ml 1%溴酚蓝 1.5ml 1%二甲苯青 FF 100ul 0.5mol/L EDTA(pH8.0) 4g 补足到 10ml 10×十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液(室温贮存) 成分及终浓度 配制 10ml 溶液各成分用量 0.2%溴酚蓝 0.2%二甲苯青 FF 200 mmol/L EDTA 0.1%SDS 50%甘油 水 20mg 4ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0) 100ul 10% SDS 5ml 补足到 10ml 20mg 2.5ml 1%溴酚蓝 2.5ml 1%二甲苯青 FF

三.常用培养基 LB 培养基 将下列组分溶解在 0.9L 水中: 蛋白胨 10g 酵母提取物 5g 氯化钠 10g 如果需要用 1N NaOH(~1ml)调整 pH 至 7.0,再补足水至 1L。注:琼脂平板需添加琼脂粉 12g/L,上层琼 脂平板添加琼脂粉 7g/L。 SOB 培养基 将下列组分溶解在 0.9L 水中: 蛋白胨 20g 酵母提取物 5g 氯化钠 0.5g 1 mol/L 氯化钾 2.5ml 用水补足体积到 1L。分成 100ml 的小份,高压灭菌。培养基冷却到室温后,再在每 100ml 的小份中加 1ml 灭过菌的 1mol/L 氯化镁。 SOC 培养基 成分、方法同 SOB 培养基的配制,只是在培养基冷却到室温后,除了在每 100ml 的小份中加 1ml 灭过菌的 1mol/L 氯化镁外, 再加 2ml 灭菌的 1mol/L 葡萄糖 (18g 葡萄糖溶于足够水中, 再用水补足到 100ml, 用 0.22um 的滤膜过滤除菌)。 TB 培养基 将下列组分溶解在 0.9L 水中: 蛋白胨 12g 酵母提取物 24g 甘油 4ml 各组分溶解后高压灭菌。冷却到 60℃,再加 100ml 灭菌的 170mmol/L KH2PO4/0.72 mol/L K2HPO4 的溶液 (2.31g 的 KH2PO4 和 12.54gK2HPO4 溶在足量的水中,使终体积为 100ml。高压灭菌或用 0.22um 的滤膜过 滤除菌)。 2×YT 培养基 将下列组分溶解在 0.9L 水中: 蛋白胨 16g 酵母提取物 10g 氯化钠 4ml 如果需要用 1N NaOH(~1ml)调整 pH 至 7.0,再补足水至 1L。注:琼脂平板需添加琼脂粉 12g/L,上层琼 脂平板添加琼脂粉 7g/L。 YPD 培养基 将下列组分溶解在 0.9L 水中: 蛋白胨 20g 酵母提取物 10g 葡萄糖 20g 用水补足体积为 1L 后,高压灭菌。建议在高压灭菌之前,对色氨酸营养缺陷型每升培养基添加 1.6g 色氨 酸,因为 YPD 培养基是色氨酸限制型培养基。为了配制平板,需要在高压灭菌前加入 20g 琼脂粉。 四.常用抗生素

氨苄青霉素(ampicillin)(100mg/ml) 溶解 1g 氨苄青霉素钠盐于足量的水中, 最后定容至 10ml。 分装成小份于-20℃贮存。 常以 25ug/ml~50ug/ml 的终浓度添加于生长培养基。 羧苄青霉素(carbenicillin)(50mg/ml) 溶解 0.5g 羧苄青霉素二钠盐于足量的水中,最后定容至 10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以 25ug/ml~ 50ug/ml 的终浓度添加于生长培养基。 甲氧西林(methicillin)(100mg/ml) 溶解 1g 甲氧西林钠于足量的水中,最后定容至 10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以 37.5ug/ml 终浓度与 100ug/ml 氨苄青霉素一起添加于生长培养基。 卡那霉素(kanamycin)(10mg/ml) 溶解 100mg 卡那霉素于足量的水中,最后定容至 10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以 10ug/ml~50ug/ml 的终浓度添加于生长培养基。 氯霉素(chloramphenicol)(25mg/ml) 溶解 250mg 氯霉素足量的无水乙醇中, 最后定容至 10ml。 分装成小份于-20℃贮存。 常以 12.5ug/ml~25ug/ml 的终浓度添加于生长培养基。 链霉素(streptomycin)(50mg/ml) 溶解 0.5g 链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中, 最后定容至 10ml。 分装成小份于-20℃贮存。 常以 10ug/ml~ 50ug/ml 的终浓度添加于生长培养基。 萘啶酮酸(nalidixic acid)(5mg/ml) 溶解 50mg 萘啶酮酸钠盐于足量的水中,最后定容至 10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以 15ug/ml 的终浓 度添加于生长培养基。 四环素(tetracyyline)(10mg/ml) 溶解 100mg 四环素盐酸盐于足量的水中,或者将无碱的四环素溶于无水乙醇,定容至 10ml。分装成小份用 铝箔包裹装液管以免溶液见光,于-20℃贮存。常以 10ug/ml~50ug/ml 的终浓度添加于生长培养基。 几种溶液的配制方法 1、PBS: 取 ZLI-9061 PBS 溶于 1000ml 的蒸馏水中,混匀,测 pH 值应在 7.2~7.4 之间,若偏离此范围,请 用 0.1N 的 HCL 或 NaOH 调整。 2、TBS: 2.1 Tris 缓冲液配方:(0.5 M pH7.6) Tris(三羟甲基氨基甲烷) 1N HCL 双蒸水 Tris 缓冲液配制方法: 先以少量双蒸水(300~500ml)溶解 Tris,加入 HCl 后,用 HCl(1N)或 NaOH(1N)将 pH 调 至 7.6, 最后双蒸水加至 1000ml。此液为储备液,4℃冰箱中保存。 2.2 TBS 配方: Tris-HCI 缓冲液(0.5M NaCI 双蒸水 TBS 配制方法: 先以少量双蒸水溶解 NaCl,再加入 Tris-HCl 缓冲液,最后加双蒸水至 1000ml,充分摇匀。 3、枸橼酸盐缓冲液(Citrate buffer): 3.1 储存液: pH7.6) 加至 1000ml 100ml 8.5~9g (0.15mol/L) 约 420ml 加至 1000ml 60.57g

A. 0.1M 枸橼酸溶液:称取 21.01g 枸橼酸(C6H8O7?H20)溶于 1000ml 蒸馏水中。 B. 0.1M 枸橼酸钠溶液:称取 29.41g 枸橼酸钠(C6H5Na3O7?2H20)溶于 1000ml 蒸馏水中。 3.2 工作液: 0.1? 取 9ml A 液和 41ml B 液加入 450ml 蒸馏水中,溶液 pH 值应为 6.0

4、胰酶(Trypsin): 4.1 ZLI-9011 胰蛋白酶消化液: 常用浓度为 0.125%,即使用前将一滴试剂 1 胰酶溶液和三滴试剂 2 胰酶稀释液均匀混合(1:3 稀 释),则可直接滴加使用。胰酶的最终浓度可以根据使用者的要求进行调整,浓度范围可以从 0.05%(1:10 稀释)至 0.25%(1:1 稀释)。 4.2 ZLI-9010 胰蛋白酶: 取 0.05g 或 0.1g 胰蛋白酶加入到 100ml 0.05%或 0.1% pH7.8 的无水氯化钙水溶液中,溶解即可。 5、胃酶(Pepsin): 4%胃蛋白酶,用 0.1mol/L HCL 配制。 (我公司备有 ZLI-9013 胃蛋白酶消化工作液,不需稀释直接滴加使用,欢迎选购) 6、DAB: 6.1 ZLI-9032/9033 DAB Kit: 使用前只需将试剂盒提供的 A、B、C 三种试剂各一滴加至 1ml 双蒸水中,即可获得 1ml DAB 工作 液,简单易用。 6.1 ZLI-9030 DAB: 6mgDAB 溶于 10mlTBS(0.05M pH7.6),再加入 0.1ml 浓度为 3%的 H2O2,过滤掉沉淀物,即可。 7、AEC: 4mg AEC 溶于 1ml 二甲基甲酰胺中, 加入 14ml 浓度为 0.1M 的醋酸缓冲液 (pH5.2) , 然后加入 0.15ml 3%H2O2, 过滤掉沉淀物。 8、RIPA: 1×PBS,1%NP 40,0.5 sodium deoxycholate,0.1% SDS(此液体可长期保存)。以下抑制剂以储存液方 式保存,临用前加入 RIPA 中。 8.1 10mg/ml l/ml)?PMSF 异丙醇溶液(用量为 10 l/ml)?8.2 Aprotinin(Sigma 产品,用量为 30 8.3 1000mM sodium orthovanadate 冷冻液 l/ml)?(用量为 10 9、Blotto A: 常规使用 1×PBS,5% milk,0.05% Tween 20。 10、Blotto B: 与 Phosphotyrosine 抗体共用,1×PBS,1% milk,0.05% Tween 20。部分实验中 milk 可完全去除,但可 能引起背景增高。 举报删除此信息 Eric6007 (站内联系 TA) 实验室常用贮存液的配制参数 一、核酸及蛋白质常用数据 化合物 ATP CTP GTP 分子量 507 483 523 λ max(pH7.0) 259 271 253 1 摩尔溶液(pH7.0)中 λ max 时的最大吸收值 15400 9000 13700 OD280/OD260 0.15 0.97 0.66

UTP dATP dCTP dGTP dTTP 核酸 λ DNA pBR322 28SrRNA 23SrRNA 18SrRNA 19SrRNA 5SrRNA

484 494 467 507 482 核苷酸数

262 259 271 253 267 分子量

10000 15200 9300 13700 9600

0.38 0.15 0.98 0.66 0.71

2.常用核酸的长度与分子量 48502(双链环状) 4363(双链) 4800 3700 1900 1700 120 75 1.6×106 1.2×106 6.1×105 5.5×105 3.6×104 2.5×104 3.0×107 2.8×106

tRNA(大肠杆菌) 3.常用核酸蛋白换算数据 (1)重量换算 1μ g=10-6g 1ng=10-9g (2)分光光度换算: 1A260 双链 DNA=50μ g/ml 1A260 单链 DNA=30μ g/ml 1A260 单链 RNA=40μ g/ml (3)DNA 摩尔换算:

1pg=10-12g 1fg=10-15g

1μ g 100bp DNA=1.52pmol=3.03pmol 末端 1μ g pBR322 DNA=0.36pmol 1pmol 1000bp DNA=0.66μ g 1pmol pBR322=2.8μ g 1kb 双链 DNA(钠盐)=6.6×105 道尔顿 1kb 单链 DNA(钠盐)=3.3×105 道尔顿 1kb 单链 RNA(钠盐)=3.4×105 道尔顿 (4)蛋白摩尔换算: 100pmol 分子量 100,000 蛋白质=10μ g 100pmol 分子量 50,000 蛋白质=5μ g 100pmol 分子量 10,000 蛋白质=1μ g 氨基酸的平均分子量=126.7 道尔顿 (5)蛋白质/DNA 换算: 1kb DNA=333 个氨基酸编码容量=3.7×104MW 蛋白质 10,000MW 蛋白质=270bp DNA 30,000MW 蛋白质=810bp DNA 50,000MW 蛋白质=1.35kb 100,000MW 蛋白质=2.7kb DNA 4.常用蛋白质分子量标准参照物 (1)高分子量标准参照 (2)中分子量标准参照 (3)低分子量标准参照

肌球蛋白 肌球蛋白 β -半乳糖甘酶 B 磷酸化酶 B 牛血清白蛋白 过氧化氢酶` 醛缩酶

分子量 212, 000

磷酸化酶 B 牛血清白蛋白 116,000

97,400 66, 200

碳酸酐酶 大豆脻蛋白酶 55,000 溶菌酶 肌球蛋白(F2) 2,500

31,00 21, 500 16,900 14,400 8,100 6,200 抑制剂

谷氨酶脱氢酶 卵白蛋白 醛缩酶 碳酸酐酶 42,700 40,000 31,000 21,500 肌球蛋白(F3) 14,400 λ /HindⅢ+EcoRⅠ 587 405 504 458 434 267 234 213 192 184 124 7 51 21 18 11 89 80 64 57 123 104

97,400 66,200 57,000 40,000 抑制剂 溶菌酶

马心肌球蛋白 肌球蛋白(F1)

大豆脻蛋白酶

5.常用 DNA 分子量标准参照物 λ DNA/HindⅢ 23130 9416 6557 4361 2322 2027 564 125 21226 7421 5804 5643 4843 3530 λ DNA/EcoRⅠ 21227 5148 4973 4268 3530 2027 1904 1584 1375 974 831 564 125 续上表 pBR322/HinfⅠ 1631 517 506 396 344 298 221 220 154 75 726 713 553 500 417 413 311 249 200 151 φ χ 174/HinfⅠ 140 118 100 82 66 48 42 40 24 1353 1078 872 603 310 281 271 234 194 118 72 二、常用缓冲液 1.分子克隆常用缓冲液 2.磷酸缓冲液 (1)25℃下 0.1mol/L 磷酸钾缓冲液的配制※ pH 5.8 6.0 1mol/L K2HPO4(ml) 8.5 13.2 91.5 86.8 1mol/L KH2PO4(ml) φ χ 174/Hae Ⅲ 2914 1175 404 327 231 141 87 54 33 20 φ χ 174/TapⅠ pBR322/HaeⅢ

6.2 6.4 6.6 6.8 7.0 7.2 7.4 7.6 7.8 8.0 pH 5.8 6.0 6.2 6.4 6.6 6.8 7.0 7.2 7.4 7.6 7.8 8.0

19.2 27.8 38.1 49.7 61.5 71.7 80.2 86.6 90.8 94.0

80.8 72.2 61.9 50.3 38.5 28.3 19.8 13.4 9.2 6.2 1mol/L NaH2PO4(ml)

(2)25℃下 0.1mol/L 磷酸钠缓冲液的配制※ 1mol/L Na2HPO4(ml) 7.9 12.0 17.8 25.5 35.2 46.3 57.7 68.4 77.4 84.5 89.6 93.2 92.1 88.0 82.2 74.5 64.8 53.7 42.3 31.6 22.6 15.5 10.4 6.8

※:用蒸馏水将混合的两种 1mol/L 贮存液稀释至 1000ml, 根据 Henderson-Hasselbalch 方程计算其 pH 值: pH=pK’+1g(/) 在此,pK’=6.86(25℃)。 3.电泳缓冲液 测序凝胶加样缓冲液 98%去离子甲酰胺 10mol/L EDTA(pH8.0) 0.025%二甲苯青 FF 0.025%溴酚蓝 甲酰胺:许多批号的试剂级甲酰胺,其纯度符合使用要求,无须再进行处理。不过,一旦略呈黄色,则应 用在磁力搅拌器上将甲酰胺与 Dowex XG8 混合床树脂共同搅拌 1 小时进行去离子处理,并用 Whatman 1 号 滤纸过滤 2 次,去离子甲酰胺分装成小份,充氮存于-70℃。 常用的电泳缓冲液 缓冲液 使用液 0.001mol/L EDTA Tris-磷酸(TPE) 浓贮存液(每升) 1×:0.04mol/L Tris-乙酸 57.1ml 冰乙酸 10×:10g Tris 碱 100ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0) 1×:0.09mol/L Tris-磷酸 40ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0) 0.002mol/L EDTA 15.5ml85%磷酸(1.679g/ml) 50×:242g Tris 碱 Tris-乙酸(TAE)

Tris-硼酸(TBE)a 0.001mol/L EDTA 碱性缓冲液 b Tris-甘氨酸 c 0.1% SDS 说明:

0.5×0.045mol/L Tris-硼酸 27.5 硼酸 20ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0) 1×:50mmol/L NaOH 1×:25mmol/L Tris

5×:54g Tris 碱

1×:5ml 10mol/L NaOH 5×:15.1g Tris

1mmol/L EDTA 250mmol/L 甘氨酸

2ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0) 94g 苷氨酸(电泳级)(pH8.3) 50ml 10% SDS(电泳级)

①TBE 溶液长时间存放后会形成沉淀物,为避免这一问题,可在室温下用玻璃瓶保存 5×溶液,出现沉淀后 则予以废弃。 以片都以 1×TBE 作为使用液(即 1:5 稀释浓贮液)进行琼脂糖凝胶电泳。但 0.5×的使用液已具备足够 的缓冲容量。目前几乎所有的琼脂糖胶电泳都以 1:10 稀释的贮存液作为使用液。 进行聚丙烯酰胺凝胶垂直槽的缓冲液槽较小, 故通过缓冲液的电流量通常较大,需要使用 1×TBE 以提供 足够的缓冲容量。 ②碱性电泳缓冲液应现用现配。 ③Tris-甘氨酸缓冲液用 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳。 2×SDS 凝胶加样缓冲液: 100mmol/L Tris?HCl(6.8) 200mmol/L 二硫苏糖醇(DTT) 4%SDS(电泳级) 0.2%溴酚蓝 20%甘油 不含 DTT 的 2×SDS 凝胶加样缓冲液可保存于室温,应在临用前取 1mol/L 贮存液现加于上述缓冲液中。 4.凝胶加样缓冲液 缓冲液类型 Ⅰ 4℃ 0.25%二甲苯青 FF 40%(W/V)蔗糖水溶液 Ⅱ 室温 0.25%二甲苯青 FF 15%聚蔗糖(Ficoll400) Ⅲ 4℃ 0.25%二甲苯青 FF 30%甘油水溶液 Ⅳ 4℃ 40%(W/V)蔗糖水溶液 碱性加样缓冲液: 300mmol/L NaOH 6mmol/L EDTA 0.25%溴酚蓝 0.25%溴酚蓝 0.25 溴酚蓝 6×缓冲液 0.25%溴酚蓝 贮存温度

Ⅴ 4℃

18%聚蔗糖(Ficoll400) 0.15%溴甲酚绿 0.25%二甲苯青 FF

使用以上凝胶加样缓冲液的目的有三:增大样品密度;以确保 DNA 均匀进入样品孔内;使样品呈现颜色, 从而使加样操作更为便利,含有在电块中能以可预知速率向阳极泳动的染料。溴酚蓝在琼脂糖中移动的速 率约为二甲苯青 FF 的 2.2 倍,而与琼脂糖浓度无关。以 0.5×TBF 作电泳液时,溴酚蓝在琼脂糖中的泳动 速率约与长 300bp 的双链线状 DNA 相同,而二甲苯青 FF 的泳动则与长 4kb 的双链线状 DNA 相同。在琼脂糖 浓度为 0.5%~1.4%的范围内,这些对应关系受凝胶浓度变化的影响并不显著。 选用哪一种加样染料纯属个人喜恶。但是,对于碱性凝胶应当使用溴甲酚绿作为示踪染料,因为在碱性 pH 条件下其显色较溴酚更蓝为鲜明。 5.各种 pH 值的 Tris 缓冲液的配制 各种 pH 值的 Tris 缓冲液的配制 所需 pH 值(25℃) 7.1 7.2 7.3 7.4 7.5 7.6 7.7 7.8 7.9 8.0 8.1 8.2 8.3 8.4 8.5 8.6 8.7 8.8 8.9 45.7 44.7 43.4 42.0 40.3 38.5 36.6 34.5 32.0 29.2 26.2 22.9 19.9 17.2 14.7 12.4 10.3 8.5 7.0 0.1mol/L HCl 的体积

某一特定 pH 值的 0.05mol/L Tris 缓冲液的配制:将 50ml 0.1mol/L Tris 碱溶液与上表所示相应体积(单 位:ml)的 0.1ml/L HCl 混合,加水将体积调至 100ml (2)温度对 50mmol/L Tris?HCl 液 pH 值的影响 4℃ 8.1 8.2 8.3 8.4 8.5 8.6 8.7 25℃ 7.5 7.6 7.7 7.8 7.9 8.0 8.1 37℃ 7.2 7.3 7.4 7.5 7.6 7.7 7.8

8.8 8.9 9.0 9.1 9.2 9.3 9.4 缓冲液 Trisa HEPESb MPOSc PIPESd MESe

8.2 8.3 8.4 8.5 8.6 8.7 8.8 分子量 12.1 283.3 209.3 304.3 195.2

7.9 8.0 8.1 8.2 8.3 8.4 8.5 pKa 值 8.08 7.47 7.15 6.76 6.09 缓冲范围 7.1~7.9 7.2~8.2 6.6~7.8 6.2~7.3 5.4~6.8

(6)常用缓冲液的 pKa 值

a:三羟甲基氨基甲烷;b:N-2-羟乙基哌嗪-N’-2-乙磷酸;c:3-(N-吗啉代)丙磺酸;d:N,N’-双(2乙磺酸)哌嗪;e:2-(N-吗啉代)乙磺酸。 7.温度对常用缓冲液 pH 的影响 缓冲体系 Mes Ada PiPes Aces Bes Mops Tes Hepes Tricine Tris Bicine Glycylglycine 三、常用酶的配制 1.溶菌酶 用水配制成 50mg/ml 的溶菌酶溶液,分装成小份并保存于-20℃。每一小份一经使用后便予丢弃。 2.蛋白水解酶类 贮存液 链霉蛋白酶 a EDTA 37℃ 0.5% SDS 0.01mol/L Tris(pH7.8) 蛋白酶 Kc EDTA 20mg/ml 37~56℃ 0.5% SDS a:链霉蛋白酶是从链球菌(Streptomyces griseus)中分离到的一种丝氨酸酶和酸性蛋白酶的混合物。 -20℃(溶于水) 无须预处理 50μ g/ml 0.005mol/L 贮存温度 20mg/ml 自消化 b 反应浓度 -20℃(溶于水) 反应缓冲液 1mg/ml 温度 0.01mol/L 预处理 0.01mol/L Tris(pH7.8) 6.15 6.60 6.80 6.90 7.15 7.20 7.50 7.55 8.15 8.30 8.35 8.40 pKa(20℃) -0.110 -0.110 -0.085 -0.200 -0.160 -0.013 -0.200 -0.014 -0.210 -0.310 -0.180 -0.280 △pKa/10℃

b:自消化可消除 DNA 酶和 RNA 酶的污染,经自消化的链酶蛋白酶的配制方法如下:把该酶的粉末溶解于 10mmol./L Tris?HCl(pH7.5)、10mmol/L NaCl 中,配成 20mg/ml 浓度,于 37℃温育 1h。经消化的链霉蛋 白酶分装成小份放在密封试管中,保存-20℃。 c:蛋白酶 K 是一种枯草蛋白酶类的高活性蛋白酶,从林伯氏白色念球菌(Tritirachium album Limber) 中纯化得到。该酶有两个 Ca2+结合位点,它们离酶的活性中心有一定距离,与催化机理并无直接关系。然 而,如果从该酶中除去 Ca2+,由于出现远程的结构变化,催化活性将丧失 80%左右,但其剩余活性通常已 足以降解在一般情况下污染酸制品的蛋白质。 所以, 蛋白酶 K 消化过程中通常加入 EDTA (以抑制依赖于 Mg2+ 的核酸酶的作用)。但是,如果要消化对蛋白酶 K 具有较强耐性的蛋白,如角蛋白一类,则可能需要使用 含有 1mmol/L Ca2+而不含 EDTA 的缓冲液。 在消化完毕后、 纯化核酸前要加入 EGT (pH8.0) 至终浓度为 2mmol/L, 以鳌合 Ca2+。 3.无 DNA 酶的 RNA 酶 将胰 RNA 酶(RNA 酶 A)溶于 10mmol/L Tris?HCl(pH7.5)、15mmol/L NaCl 中,配成 10mg/ml 的浓度,于 100℃加热 15min,缓慢冷却至室温,分装成小份保存于-20℃。

四、常用抗生素溶液
Eric6007 (站内联系 TA) 四、常用抗生素溶液 抗生素 浓度 氨苄青霉素 羧苄青霉素 氯霉素 卡那霉素 链霉素 四环素 b 贮存液 a 保存条件 50mg/ml(溶于水) 50mg/ml(溶于水) 34mg/ml(溶于乙醇) 10mg/ml(溶于水) 10mg/ml(溶于水) 5mg/ml(溶于乙醇) 工作浓度 严紧型质粒 -20℃ -20℃ -20℃ -20℃ -20℃ -20℃ 松弛型质粒 20μ g/ml 20μ g/ml 25μ g/ml 10μ g/ml 10μ g/ml 10μ g/ml 60μ g/ml 60μ g/ml 170μ g/ml 50μ g/ml 50μ g/ml 50μ g/ml

a:以水为溶剂的抗生素贮存液通过 0.22μ m 滤器过滤除菌。以乙醇为溶剂的抗生素溶液无须除菌处理。所 有抗生素溶液均应放于不透光的容器保存。 b:镁离子是四环素的拮抗剂,四环素抗性菌的筛选应使用不含镁盐的培养基(如 LB 培养基)。 五、常用贮存液的配制 1.30%丙烯酰胺溶液 【配制方法】 将 29g 丙烯酰胺和 1g N,N’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为 60ml 的水中。加热至 37℃溶解之,补加水至 终体积为 100ml。用 Nalgene 滤器(0.45μ m 孔径)过滤除菌,查证该溶液的 pH 值应不大于 7.0,置棕色 瓶中保存于室温。 【注意】 丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可以通过皮肤吸收,其作用具累积性。称量丙烯酰胺和亚甲双丙烯酰胺时 应戴手套和面具。可认为聚丙烯酰胺无毒,但也应谨慎操作,因为它还可能会含有少量未聚合材料。 一些价格较低的丙烯酰胺和双丙烯酰胺通常含有一些金属离子,在丙烯酰胺贮存液中加入大约 0.2 体积的 单床混合树脂(MB-1 Mallinckrodt),搅拌过夜,然后用 Whatman 1 号滤纸过滤以纯化之。 在贮存期间,丙烯酰胺和双丙烯酰胺会缓慢转化成丙烯酰和双丙烯酸。 2.40%丙烯酰胺

【配制方法】 把 380g 丙烯酰胺(DNA 测序级)和 20g N,N’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为 600ml 的蒸馏水中。继续按 上述配制 30%丙烯酰胺溶液的方法处理,但加热溶解后应以蒸馏水补足至终体积为 1L。 【注意】 见上述配制 30%丙烯酰胺的说明,40%丙烯酰胺溶液用于 DNA 序列测定。 3.放线菌素 D 溶液 【配制方法】 把 20mg 放线菌素 D 溶解于 4ml 100%乙醇中,1:10 稀释贮存液,用 100%乙醇作空白对照读取 OD440 值。 放线菌素 D(分子量为 1255)纯品在水溶液中的摩尔消化系数为 21,900,故而 1mg/ml 的放线菌素 D 溶液 在 440nm 处的吸光值为 0.182,放线菌素 D 的贮存液应放在包有箔片的试管中,保存于-20℃。 【注意】 放线菌素 D 是致畸剂和致癌剂,配制该溶液时必须戴手套并在通风橱内操作,而不能在开放在实验桌面上 进行,谨防吸入药粉或让其接触到眼睛或皮肤。 药厂提供的作治疗用途的放线菌素 D 制品常含有糖或盐等添加剂。只要通过测量贮存液在 440nm 波长处的 光吸收确定放线菌素 D 的浓度,这类制品便可用于抑制自身引导作用。 4.0.1mol/L 腺苷三磷酸(ATP)溶液 【配制方法】 在 0.8ml 水中溶解 60mg ATP,用 0.1mol/L NaOH 调至 pH 值至 7.0,用蒸馏水定容 1ml,分装成小份保存于 -70℃ 5.10mol/L 乙酸酰溶液 【配制方法】 把 770g 乙酸酰溶解于 800ml 水中,加水定容至 1L 后过滤除菌。 6.10%过硫酸铵溶液 【配制方法】 把 1g 过硫酸铵溶解于终量为 10ml 的水溶液中,该溶液可在 4℃保存数周。 7.BCIP 溶液 【配制方法】 把 0.5g 的 5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸二钠盐(BCIP)溶解于 10ml 100%的二甲基甲酰胺中,保存于 4℃ 8.2×BES 缓冲盐溶液 【配制方法】 用总体积 90ml 的蒸馏水溶解 1.07g 盐溶液 BES、1.6g NaCl 和 0.027g Na2HPO4,室温下用 HCl 调节 该溶 液的 pH 值至 6.96、 然后加入蒸馏水定容至 100ml, 用 0.22μ m 滤器过滤除菌, 分装成小份, 保存于-20℃。 9.1mol/L CaCl2 溶液 【配制方法】 在 200ml 蒸馏水中溶解 54g CaCl2?6H2O,用 0.22μ m 滤器过滤除菌,分装成 10ml 小份贮存于-20℃。 【注意】 制备感受态细胞时, 取出一小份解冻并用蒸馏水稀释至 100ml, 用 Nalgene 滤器 (0.45μ m 孔径) 过滤除菌, 然后骤冷至 0℃。 10.2.5mol/L CaCl2 溶液 【配制方法】 在 20ml 蒸馏水中溶解 13.5g CaCl2?6H2O,用 0.22μ m 滤器过滤除菌,分装成 1ml 小份贮存于-20℃。 11.1mol/L 二硫苏糖醇(DTT)溶液 【配制方法】 用 20ml 0.01mol/L 乙酸钠溶液(pH5.2)溶解 3.09g DTT,过滤除菌后分装成 1ml 小份贮存于-20℃。

【注意】 DTT 或含有 DTT 的溶液不能进行高压处理。 12.脱氧核苷三磷酸(dNTP)溶液 【配制方法】 把每一种 dNTP 溶解于水至浓度各为 100mmol/L 左右,用微量移液器吸取 0.05mol/L Tris 碱分别调节 每一 dNTP 溶液的 pH 值 7.0(用 pH 试纸检测),把中和后的每种 dNTP 溶液各取一份作适当稀释,在下表中给出 的波长下读取光密度计算出每种 dNTP 的实际浓度,然后用水稀释成终浓度为 50mmol/L 的 dNTP,分装成小 份贮存于-70℃。 碱基 A G C T 259 253 271 260 波长(nm) 1.54×104 1.37×104 9.10×103 7.40×103 消化系数(ε )

比色杯光径为 1cm 时,吸光度=ε M 13.0.5mol/L EDTA(pH8.0)溶液 【配制方法】 在 800ml 水中加入 186.1g 二水乙二胺四乙酸二钠(EDTA-Na?2H2O),在磁力搅拌器上剧烈搅拌,用 NaOH 调节 溶液的 pH 值至 8.0(约需 20g NaOH 颗粒)然后定容至 1L,分装后高压灭菌备用。 【注意】 EDTA 二钠盐需加入 NaOH 将溶液的 pH 值调至接近 8.0,才能完全溶解。 14.溴化乙锭(10mg/ml 溶液) 【配制方法】 在 100ml 水中加入 1g 溴化乙锭,磁力搅拌数小时以确保其完全溶解,然后用铝箔包裹容器或转移至棕色瓶 中,保存于室温。 【注意】 小心:溴化乙锭是强诱变剂并有中度毒性,使用含有这种染料的溶液时务必戴上手套,称量染料时要戴面 罩。 15.2×HEPES 缓冲盐溶液 【配制方法】 用总量为 90ml 的蒸馏水溶解 1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027g Na2PO4?2H2O、0.2g 葡聚糖和 1gHEPES,用 0.5mol/L NaOH 调节 pH 值至 7.05, 再用蒸馏水定容至 100ml。 用 0.22μ m 滤器过滤除菌, 分装成 5ml 小份, 贮存于-20℃。 16.IPTG 溶液 【配制方法】 IPTG 为异丙基硫代-β -D-半乳糖苷(分子量为 238.3),在 8ml 蒸馏水中溶解 2g IPTG 后,用蒸馏水定容 至 10ml,用 0.22μ m 滤器过滤除菌,分装成 1ml 小份贮存于-20℃。 17.1mol/L 乙酸镁溶液 【配制方法】 在 800ml 水中溶解 214.46g 四水乙酸镁,用水定容至 1L 过滤除菌。 18.1mol/L MgCl2 溶液 【配制方法】 在 800ml 水中溶解 203.4g MgCl2?6H2O,用水定容至 1L,分装成小份并高压灭菌备用。 【注意】 MgCl2 极易潮解,应选购小瓶(如 100g)试剂,启用新瓶后勿长期存放。

19.β -巯基乙醇(BME)溶液 【配制方法】 一般得到的是 14.4mol/L 溶液,应装在棕色瓶中保存于 4℃。 【注意】 BME 或含有 BME 的溶液不能高压处理。 20.NBT 溶液 【配制方法】 把 0.5g 氯化氮蓝四唑溶解于 10ml 70%的二甲基甲酰胺中,保存于 4℃。 21.酚/氯仿溶液 【配制方法】 把酚和氯仿等体积混合后用 0.1mol/L Tris?HCl(pH7.6)抽提几次以平衡这一混合物,置棕色玻璃瓶中,上 面覆盖等体积的 0.01mol/L Tris?HCl(pH7.6)液层,保存于 4℃。 【注意】 酚腐蚀性很强,并可引起严重灼伤,操作时应戴手套及防护镜,穿防护服。所有操作均应在化学通风橱中 进行。与酚接触过的部位皮肤应用大量的水清洗,并用肥皂和水洗涤,忌用乙醇。 22.10mmol/L 苯甲基磺酰氟(PMSF)溶液 【配制方法】 用异丙醇溶解 PMSF 成 1.74mg/ml (10mmol/L) , 分装成小份贮存于-20℃。 如有必要可配成浓度高达 17.4mg/ml 的贮存液(100mmol/L)。 【注意】 PMSF 严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤,吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。一旦眼睛或皮肤接触 了 PMSF,应立即用大量水冲洗之。凡被 PMSF 污染的衣物应予丢弃。 PMSF 在水溶液中不稳定。应在使用前从贮存液中现用现加于裂解缓冲液中。PMSF 在水溶液中的活性丧失速 率随 pH 值的升高而加快,且 25℃的失活速率高于 4℃。pH 值为 8.0 时,20μ mmol/L PMSF 水溶液的半寿期 大约为 85min,这表明将 PMSF 溶液调节 为碱性(pH>8.6)并在室温放置数小时后,可安全地予以丢弃。 23.磷酸盐缓冲溶液(PBS)溶液 【配制方法】 在 800ml 蒸馏水中溶解 8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4 和 0.24g KH2PO4,用 HCl 调节 溶液的 pH 值至 7.4 加水定容至 1L,在 15lbf/in2(1034×105Pa)高压下蒸气灭菌 20min。保存于室温。 24.1mol/L 乙酸钾(pH7.5)溶液 【配制方法】 将 9.82g 乙酸钾溶解于 90ml 纯水中, 用 2mol/L 乙酸调节 pH 值至 7.5 后加入纯水定容到 1L, 保存于-20℃。 25.乙酸钾溶液(用于碱裂解) 【配制方法】 在 60ml 5mol/L 乙酸钾溶液中加入 11.5ml 冰乙酸和 28.5ml 水, 即成钾浓度为 3mol/L 而乙酸根浓度为 5mol/L 的溶液。 26.3mol/L 乙酸钠(pH5.2 和 pH7.0)溶液 【配制方法】 在 80ml 水中溶解 408.1g 三水乙酸钠,用冰乙酸调节 pH 值至 5.2 或用稀乙酸调节 pH 值至 7.0,加水定容 到 1L,分装后高压灭菌。 27.5mol/L NaCl 溶液 【配制方法】 在 800ml 水中溶解 292.2g NaCl 加水定容至 1L,分装后高压灭菌。 28.10%十二烷基硫酸钠(SDS)溶液

【配制方法】 在 900ml 水中溶解 100g 电泳级 SDS,加热至 68℃助溶,加入几滴浓盐酸调节 溶液的 pH 值至 7.2,加水定 容至 1L,分装备用。 【注意】 SDS 的微细晶粒易扩散, 因此称量时要戴面罩, 称量完毕后要清除残留在称量工作区和天平上的 SDS, 10% SDS 溶液无须灭菌。 29.20×SSC 溶液 【配制方法】 在 800ml 水中溶解 175.3g NaCl 和 88.2g 柠檬酸钠,加入数滴 10mol/L NaOH 溶液调节 pH 值至 7.0,加水 定容至 1L,分装后高压灭菌。 30.20×SSPE 溶液 【配制方法】 在 800ml 水中溶解 17.5g NaCl、27.6g NaH2PO4?H2O 和 7.4g EDTA,用 NaOH 溶液调节 pH 值至 7.4(约需 6.5ml 10ml/L NaOH),加水定容至 1L,分装后高压灭菌。 31.100%三氯乙酸溶液 【配制方法】 在装有 500g TCA 的瓶中加入 227ml 水,形成的溶液含有 100%(M/V)TCA。 32.1mol/L Tris 溶液 【配制方法】 在 800ml 水中溶解 121.91g Tris 碱,加入浓 HCl 调节 pH 值至所需值。 pH 7.4 7.6 8.0 【注意】 如 1mol/L 溶液呈现黄色,应予丢弃并置备质量更好的 Tris。 尽管多种类型的电极均不能准确测量 Tris 溶液的 pH 值,但仍可向大多数厂商购得合适的电极。 Tris 溶液的 pH 值因温度而异,温度每升高 1℃,pH 值大约降低 0.03 个单位。例如:0.05mol/L 的溶液在 5℃、25℃、和 37℃时的 pH 值分别为 9.5、8.9 和 8.6。 33.Tris 缓冲盐溶液(TBS)(25mmol/L Tris) 【配制方法】 在 800ml 蒸馏水中溶解 8g NaCl、0.2g KCl 和 3g Tris 碱,加入 0.015g 酚并用 HCl 调至 pH 值至 7.4,用 蒸馏水定容至 1L,分装后在 151bf/in2(1.034×105Pa)高压下蒸汽灭菌 20min,于室温保存。 34.X-gal 溶液 【配制方法】 X-gal 为 5-溴-4-氯-3-吲哚-β -D 半乳糖苷。用二基甲酰胺溶解 X-gal 配制成的 20mg/ml 的贮存液。保存 于一玻璃管或聚丙烯管中, 装有 X-gal 溶液的试管须用铝箔封裹以防因受光照而被破坏, 并应贮存于-20℃。 X-gal 溶液无须过滤除菌。 杂交试验中用于降低背景的封闭剂 试剂 用途 Northern 杂交 使用 RNA 探针的杂交 单拷贝序列的 Southern 杂交 Denhardt 试剂 HCl 70ml 60ml 42ml

应使溶液冷至室温后方可最后调定 pH 值,加水定容至 1L,分装后高压灭菌。

将 DNA 固定于尼龙膜上的杂交 Denhardt 试剂通常配制 50×贮存液,过滤后保存于-20℃。可将该贮存液 10 倍稀释于预杂交液(常为含有 0.5%SDS 和 100μ g/ml 经变性被打断的鲑精 DNA 的 6×SSC 或 6×SSPE)中。50×Denhardt 液中含 5g 聚蔗 糖(Ficoll,400 型,Pharmacia)、5g 聚乙烯吡咯烷酮和 5g 牛血清白蛋白(组分 V”Sigmal),加水至终 体积为 500ml。 BLOTTO Grunstein-Hogness 杂交 Benton-Davis 杂交 除单拷贝序列 Southern 杂交以外的所有 Southern 杂交 斑点印迹 1×BLOTT (牛乳转移技术优化液, Bovine Lacto Transfer Technique Optimizer ) ,是含 5%胶脂奶粉和 0.02% 叠氮钠的水溶液,应保存于 4℃。使用前可用预杂交液稀释 25 倍。BLOTTO 不应与高浓度的 SDS 并用,因为 后者会导致牛奶中蛋白质析出。如果杂交背景不合要求,可在杂交液中加入 NP-40 至终浓度为 1%。BLOTTO 不能用作 Northern 杂交的封闭剂,因为这一封闭剂中可能含有 RNA 酶,其活性之高使人无法接受。 注意:叠氮钠有毒性,取用时需戴手套小心操作。含叠氮钠的溶液应予明确标记。 肝素 Southern 杂交 原位杂交 肝素 (Sigma H-7005, 从猪中提取的二级产品或相当等级的产品) 用 4×SSPE 或 4×SSC 溶解配制成 50mg/ml 的浓度,保存于 4℃。肝素在含有葡聚糖硫酸酯的杂交液中用作封闭剂的浓度为 500μ g/ml,在不含葡聚糖 硫酸酯的杂交液中的浓度为 50μ g/ml。 经变性并被打断的鲑精 DNA southern 和 Northern 杂交 把鲑鱼精子 DNA(Sigma,Ⅲ,盐钠)溶解于水配制成 10mg/ml 的浓度,必要时于室温磁力搅拌 2~4h 助溶。 把溶液中 NaCl 的浓度调至 0.1mol/L,并用酚和酚/氯仿各抽提一次,回收水相。合 DNA 溶液快速通 17 号 皮下注射针头 12 次,以剪切 DNA。加入 2 倍体积用冰预冷的乙醇沉淀 DNA。离心回收 DNA 并重溶于水,配 制成 10mg/ml 的浓度,测定溶液的 OD260 值并计算出精确的 DNA 浓度,然后煮沸 10min,分装成小份保存 于-20℃。使用前置沸水浴中加热 5min,然后迅速在冰浴中骤冷。预杂交液中应含有 100μ g/ml 经变性并 被打断的鲑鱼精子 DNA Eric6007 (站内联系 TA) 六、常用凝胶的技术参数 1.葡聚糖凝胶的某些技术数据 种类 干颗粒直径(μ ) 分子量分级范围 床体积毫升/克干分子筛 得水值 溶胀最少平衡时间(h) 肽及球形蛋白质 水浴 Sephadex G-10 3 3.5 粗级 1.0±0.1 1.5±3.5 100~300 Sephadex G-10 Sephadex G-25 (≈5~100 目) 40~ 120 3 40~ 120 3 1 1 ~1500 1500 2.5~ ~700 ~700 2~ 葡聚糖 (线性分子) 室温 沸 柱头压力(kPa)(2.5cm 直径柱)

中级 5,000 5,000 4~6 1.5±0.2 6 2 细级 目) 超细 粗级 中级 150 细级 11 超细

50~150 1,000~ 100~

(≈100~200 目)

20~800(≈200~400 10~40 100~200 50~ 1,500~ 20~80 5.0±0.3 10~40 40~ 500~ 30,000 6 2 10,000 9~

Sephadex G-50

Sephadex G-75 120 超细 15 3,000~ 10~40 7.5±0.5 40~ 120 超细 20 4,000~ 10~40 10.0±1.0 40~120 30 超细 22 10~40 15.0±1.5 40~120 40 10~40 25 型号 (分子量) (分子量) Bio-gel-P-2 Bio-gel-P-4 20.0±2.0 排阻的下限 分级分离范围 膨胀后的床体积(ml/g 干凝胶) 1,600 3,600 200~2,000 500~4,000 膨胀所需最少时间(室温,h) 3.8 5.8 2 ~4 2 ~4 800,000 72 5 200,000 20~ 0.39~1.57 400,000 72 5000~ 5 1000~ 150,000 0.88~3.53 30~ 18~ 1,000~ 1,500,000 48 5,000~ 5 150,000 2.35~9.41 1,000~ 20~ 15~ 1,000~ 70,000 24 3 950,000 12~ 3.92~15.86

Sephadex G-100

Sephadex G-150

Sephadex G-200

2.聚丙烯酰胺凝胶的技术数据

Bio-gel-P-6 Bio-gel-P-10 Bio-gel-P-30 Bio-gel-P-60 Bio-gel-P-100 Bio-gel-P-150 Bio-gel-P-200 Bio-gel-P-300 型号 %(W/W) (分子量) Sepharose 4B Sepharose 2B Sagavac 10 Seravac Sagavac 8 Sagavac 6 Sagavac 4 Sagavac 2 Bio-gel A-0.5M Bio-Rad Bio-gel A-1.5M Bio-gel A-5M Bio-gel A-15M Bio-gel A-50M Bio-gel A-150M 凝胶 Sephadex G-10 G-15 G-25 G-50 G-75 9.8 9.8 9.8 9.8 4.9 8 6 4 2

4,600 10,000 30,000 60,000 100,000 150,000 200,000 300,000

1,000~5,000 5,000~17,000 20,000~50,000 30,000~70,000 40,000~100,000 50,000~150,000 80,000~200,000 100~400,000

8.8 12.4 14.9 19.0

2~4 2~4 10~12 10~12 24 24 48 48

19.0 24.0 34.0 40.0

3.琼脂糖凝胶的技术数据 琼脂糖含量 排阻的下限 分级分离的范围(分子量) 4 2 10 2.5×105 7×105 2×106 15×106 150×106 10 8 6 4 2 1 0.5×106 1.5×106 5×106 15×106 50×106 150×106 生产厂家 Pharmacia 0.3×106~3×106 2×106~25×106 1×104~2.5×105 2.5×104~7×105 5×104~2×106 2×105~15×106 5×105~15×107 <1×104~0.5×106 <1×104~1.5×106 1×104~5×106 4×104~15×106 1×105~50×106 1×106~150×106

4.各处凝胶所允许的最大操作压 最大静水压(kPa)

5.琼脂糖凝胶浓度与线性 DNA 分辨范围 凝胶浓度(%) 0.5 0.7 1.0 1.2 1.5 2.0 800~12000 500~10000 400~7000 200~3000 50~2000 线性 DNA 长度(bp) 1000~30000

6.染料在变性聚丙烯酰胺凝胶中的迁移速度

凝胶浓度(%) 5.0 6.0 8.0 10.0 20.0 凝胶浓度(%) 3.5 5.0 8.0 12.0 15.0 20.0 氨基酸名称 丙氨酸(alanine) 精氨酸(arginine) 100bp 65bp 45bp 20bp 15bp 12bp 35bp 26bp 19bp 12bp 8bp

溴酚蓝 140bp 106bp 75bp 55bp 28bp 溴酚蓝 460bp 260bp 160bp 70bp 50bp 45bp 三字母缩写 Ala Arg Asn

二甲苯青 FF

7.染料在非变性聚丙烯酰胺凝胶中的迁移速度 二甲苯青 FF

七、氨基酸的特性 单字母缩写 A R N D C Q E G H lle Leu Lys Met Phe Pro Ser Thr Trp Tyr Val P Y P S T W L K M P 115.13 105.06 119.12 204.22 181.19 117.15 10.07 I 146.19 149.21 165.19 75.07 155.16 131.17 131.17 6.0 Asp Cys Gln Glu Gly His 89.09 174.2 132.1 133.1 121.12 146.15 147.13 4.25 3.86 12.48 质量 侧链电离的 pHa 值

天冬酰氨(asparagine) 天冬氨酸(aspartic acid) 半胱氨酸(systeine) 谷氨酰胺(glutamine) 谷氨酸(glutamic acid) 甘氨酸(glycine) 组氨酸(histidine) 异亮氨酸(isoleucine) 亮氨酸(leucine) 赖氨酸(lycine) 甲硫氨酸(methionine) 苯丙氨酸(phenylanaline) 脯氨酸(proline) 丝氨酸(serine) 苏氨酸(threonine) 色氨酸(tryptophan) 酪氨酸(tyrosine) 缬氨酸(valine) 八、遗传密码 密码子的第二位 密码子的第一位(5’端) 的第三位(3 端’) U U UUC Phe UUU Phe

U

C

A

G

密码子

UCU UCC

Ser Ser

UAU UAC

Tyr Tyr

UGU UGG

Gys

Gys 石) 珀) C U CUU

C UUA UGA UUG UGG Trp Leu CUC Leu Leu Leu Leu 终止(乳白) Leu G CCU CCC CCA CCG Pro Pro Pro Pro CAU CAC CAA CAG His His Gln Gln CGA CGC CGA CGC Arg UGG UCA A Ser UAG 终止(琥 Ser UAA 终止(赭

Arg Arg Arg A U AUU

C CUA A CUG G Ile AUC Ile Ile Met ACU ACC ACA ACG Thr Thr Thr Thr AAU AAC AAA AAG Asn Asn Lys Lys AGU AGC AGA AGC Ser

Ser Arg Arg G U GUU

C AUA A AUG G Val GUC Val Val Val GCU GCC GCA GCG Ala Ala Ala Ala GAU GAC GAA GAG Asp Asp Glu Glu GGU GGC GGA GGG Gly

Gly Gly Gly

C GUA A GUG G

九、常用酸碱技术参数 1.常见的市售酸碱的浓度 溶质 重 冰乙 酸 乙酸 甲酸 盐酸 硝酸 HCOOH HCl HNO3 CH3COOH 60.05 60.05 46.02 36.50 2.90 63.02 14.90 17.40 6.27 23.40 11.60 105 15.99 938 376 1080 424 10 1008 67 36 1.050 71 1.400 1045 36 90 99.5 1.045 1.200 1.180 344.8 1.420 67.1 62.5 1.050 159.5 42.7 86.2 57.5 分子式 分子量 mol/L g/L 重量(%) 比 配制 mol/L 溶液的加入量(ml/L)

13.30 高氯 酸 磷酸 硫酸 氢氧化 铵 氢氧化钾 氢氧化钠 NH4OH KOH NaOH 35.00 56.10 1.94 40.00 2.75 2.各种浓度的酸碱贮存液的近似 pH 值 溶质 乙酸 盐酸 硫酸 柠檬酸 氢氧化铵 氢氧化钠 碳酸氢钠 碳酸钠 J a.N 为光量浓度。 liuguilan (站内联系 TA) 辛苦了,好好学学。 dwn630 (站内联系 TA) 不错,呵呵 ljw0331 (站内联系 TA) 挺有用的,thanks!:) zsyaoyao (站内联系 TA) 兄弟,辛苦了!!:D:D:D pigfly (站内联系 TA) useful!!!!! 小萧然 (站内联系 TA) 真的很好啊,:o pandangel (站内联系 TA) 好多啊,谢谢 zhengmn (站内联系 TA) 谢谢!辛苦您啦! 11.80 14.05 11.50 1Na 0.40 0.10 0.30 0.1Na 2.90 1.07 1.20 2.10 11.30 13.07 8.40 11.00 0.01Na 3.40 2.02 2.10 2.60 14.80 HclO3 H2PO4 H2P`O4 100.50 9.20 80.00 98.10 11.65

837

61 1172 60 1445 1776 251 757 10 763 10 0.001Na 3.90 3.01 28 70

1.370

75.2 1.670 108.7 1.700 1.840 0.898 67.6 74.1 52.4 515.5 1.530 363.4 55.2 55.6 85.8

923 18.10 18.00

1.540 85 96

13.50 109 19.10 111

50 1.090 50 1.110

1.520

10.80 12.12

10.30 11.13

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分子生物学实验常用试剂配置
作者: happyboy2100 (站内联系 TA) 发布: 2006-08-22

一. 常用贮液与溶液 1mol/L 亚精胺(Spermidine): 溶解 2.55g 亚精胺于足量的水中,使终体积为 10ml。分装成 小份贮存于-20℃。 1mol/L 精胺(Spermine) :溶解 3.48g 精胺于足量的水中,使终体积为 10ml。分装成小份贮 存于-20℃。 10mol/L 乙酸胺(ammonium acetate) :将 77.1g 乙酸胺溶解于水中,加水定容至 1L 后,用 0.22um 孔径的滤膜过滤除菌。 10mg/ml 牛血清蛋白(BSA) :加 100mg 的牛血清蛋白(组分 V 或分子生物学试剂级,无 DNA 酶)于 9.5ml 水中(为减少变性, 须将蛋白加入水中,而不是将水加入蛋白) ,盖好盖后, 轻轻摇动,直至牛血清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到 10ml,然后分装成 小份贮存于-20℃。 1mol/L 二硫苏糖醇 (DTT) : 在二硫苏糖醇 5g 的原装瓶中加 32.4ml 水, 分成小份贮存于-20℃。 或转移 100mg 的二硫苏糖醇 至微量离心管, 加 0.65ml 的水配制成 1mol/L 二硫苏糖醇溶液。 8mol/L 乙酸钾(potassium acetate) :溶解 78.5g 乙酸钾于足量的水中,加水定容到 100ml。 1mol/L 氯化钾(KCl) :溶解 7.46g 氯化钾于足量的水中,加水定容到 100ml。 3mol/L 乙酸钠(sodium acetate) :溶解 40.8g 的三水乙酸钠于约 90ml 水中,用冰乙酸调溶 液的 pH 至 5.2,再加水定容到 100ml。 0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的 Na2EDTA 和 NaOH 溶液 (0.5mol/L) , 混合后形成 EDTA 的三钠盐。 或称取 186.1g 的 Na2EDTA?2H2O 和 20g 的 NaOH,并溶于水中,定容至 1L。

1mol/L HEPES:将 23.8gHEPES 溶于约 90ml 的水中,用 NaOH 调 pH(6.8-8.2) ,然后用水定 容至 100ml。 1mol/L HCl:加 8.6ml 的浓盐酸至 91.4ml 的水中。 25mg/ml IPGT:溶解 250mg 的 IPGT(异丙基硫代-β-D-半乳糖苷)于 10ml 水中,分成小份贮 存于-20℃。 1mol/LMgCl2:溶解 20.3g MgCl2?6H2O 于足量的水中,定容到 100ml。 100mmol/L PMSF:溶解 174mg 的 PMSF(苯甲基磺酰氟)于足量的异丙醇中, 定容到 10ml。 分成小份并用铝箔将装液管包裹 或贮存于-20℃。 20mg/ml 蛋白酶 K(proteinase K) :将 200mg 的蛋白酶 L 加入到 9.5ml 水中,轻轻摇动,直 至蛋白酶 K 完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到 10ml,然后分装成小份贮存于-20℃。 10mg/mlRnase(无 DNase) (DNase-free RNase) :溶解 10mg 的胰蛋白 RNA 酶于 1ml 的 10mmol/L 的乙酸钠水溶液中 (pH 5.0) 。 溶解后于水浴中煮沸 15min, 使 DNA 酶失活。 用 1mol/L 的 Tris-HCl 调 pH 至 7.5,于-20℃贮存。 (配制过程中要戴手套) 5mol/L 氯化钠(NaCl) :溶解 29.2g 氯化钠于足量的水中,定容至 100ml。 10N 氢氧化钠(NaOH) :溶解 400g 氢氧化钠颗粒于约 0.9L 水的烧杯中(磁力搅拌器搅拌) , 氢氧化钠完全溶解后用水定容至 1L。 10%SDS(十二烷基硫酸钠) :称取 100gSDS 慢慢转移到约含 0.9L 的水的烧杯中,用磁力搅 拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至 1L。 2mol/L 山梨(糖)醇(Sorbitol) :溶解 36.4g 山梨(糖)醇于足量水中使终体积为 100ml。 100%三氯乙酸(TCA):在装有 500gTCA 的试剂瓶中加入 100ml 水,用磁力搅拌器搅拌直至 完全溶解。 (稀释液应在临用前配制) 2.5% X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-半乳糖苷) :溶解 25mg 的 X-gal 于 1ml 的二甲基甲酰胺 (DMF),用铝箔包裹装液管,贮存于-20℃。 100×Denhardt 试剂(Denhardt’s regent) 成分及终浓度 配制 100ml 溶液各成分的用量 2%聚蔗糖(Ficoll,400 型) 2%聚乙烯吡咯烷酮(PVP-40) 2%BSA(组分 V) 水 2g 2g 2g 加水至总体积为 100ml ,依照上表称取各组分,溶于水中定容。过滤除菌及杂质,分装成小 份于-20℃贮存。 10×标准 DNA 连接酶缓冲液(standard DNA ligase buffer) (粘端、平端连接) 成分及终浓度 配制 10ml 溶液各成分的用量 0.5mol/L Tris-HCl:5ml1mol/L 贮液 ,100mmol/L MgCl2:1ml 1mol/L 贮液,100mmol/L DTT:1ml 1mol/L 贮液,2mmol/L ATP: 200ul 100 mmol/L 贮液,5mmol/L 盐酸亚精胺(可选):50ul 1 mmol/L 贮液,0.5mg/ml BSA(组分 V) (可选):0.5ml 10 mg/mL 贮 液 ,水: 2.25ml 将配制好的缓冲液分装成小份,贮存于-20℃ 。 100 mmol/L dNTP 溶液(dNTP solutions) 可以购买到 100mmol/L 纯 dNTPs 贮液,-80℃可贮 存至少 6 个月。 10mmol/L dNTP 混合液 成分及终浓度 配制 20ul 溶液各成分的用量 10mmol/L dATP 10mmol/L dCTP 10mmol/L dGTP 10mmol/L dTTP 水 2ul 100 mmol/L dATP 贮液 2ul 100 mmol/L dCTP 贮液 2ul 100 mmol/L dGTP 贮液

2ul 100 mmol/L dTTP 贮液 12ul 20%PEG 8000/2.5M NaCl 成分及终浓度 配制 10ml 溶液各成分的用量 质量浓度为 20%聚乙二醇 2.5mol/L 氯化钠 水 20g 50ml 5 mol/L 氯化钠 或 14.6g 固体氯化钠 补足 100ml 加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中,加水至终体积 100ml,用磁力搅拌器搅拌溶解。 20×SSC 成分及终浓度 配制 1L 溶液各成分的用量 300mmol/L 柠檬酸三钠(二水) 3mol/L 氯化钠 水 88.2g 175.3g 补足 1L 溶解柠檬酸三钠(二水)和氯化钠于约 0.9L 水中,加几滴 10N NaOH 溶液调 pH 为 7.0,用 水补足体积至 1L。 DEPC(焦碳酸二乙酯)处理水 加 100ul DEPC 于 100ml 水中,使 DEPC 的体积分数为 0.1%。在 37℃温浴至少 12h,然后 在 15 psi 条件下高压灭菌 20min, 以使残余的 DEPC 失活。 DEPC 会与胺起反应, 不可用 DEPC 处理 Tris 缓冲液。 甲酰胺(deionized formamide) 直接购买或加 Dowex XG8 混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中, 用磁力搅拌器轻轻搅拌 1h, 可去除甲酰胺中的离子。经 Whatman 1 号滤纸过滤除去树脂后分成小份,充氮气于-80℃贮 存(防止氧化) 。 磷酸缓冲液(phosphate buffer) 按照下表所给定的体积, 混合 1 mol/L 的磷酸二氢钠 (单碱) 和 1mol/L 磷酸氢二钠 (双碱) 贮液,获得所需 pH 的磷酸缓冲液。配制 1 mol/L 的磷酸二氢钠(NaH2PO4?H2O)贮液:溶 解 138g 于足量水中,使终体积为 1L;1mol/L 磷酸氢二钠(Na2HPO4)贮液:溶解 142g 于足量 水中使终体积为 1L。 1mol/L 磷酸二氢钠(ml) 1mol/L 磷酸氢二钠(ml) 最终 pH 值 TE(用于悬浮和贮存 DNA) 成分及终浓度 配制 100ml 溶液各成分的用量 10mmol/L Tris-HCl 1mmol/L EDTA 水 1ml 1mol/L Tris-HCl(pH7.4-8.0,25℃) 200ul 0.5 mol/L EDTA(pH 8.0) 98.8ml Tris 缓冲液(Tris-HCl buffer) 将 121g 的 Tris 碱溶解于约 0.9L 水中, 再根据所要求的 pH (25℃下) 加一定量的浓盐酸 (11.6N) , 用水调整终体积至 1L。 浓盐酸的体积(ml) pH

举报删除此信息 happyboy2100 (站内联系 TA) 二.电泳缓冲液、染料和凝胶加样液 电泳缓冲液 50×Tris-乙酸(TAE)缓冲液 成分及终浓度 配制 1L 溶液各成分的用量 2mol/L Tris 碱 1mol/L 乙酸 100 mmol/L EDTA 水 242g 57.1 ml 的冰乙酸(17.4 mol/L) 200ml 的 0.5 mol/L EDTA(pH 8.0) 补足 1L 5×Tris-硼酸(TBE)缓冲液 成分及终浓度 配制 1L 溶液各成分的用量 445 mmol/L Tris 碱 445 mmol/L 硼酸盐 10 mmol/L EDTA 水 54g 27.5g 硼酸 20 ml 的 0.5 mol/L EDTA(pH 8.0) 补足 1L 染料 1%溴酚蓝(bromophenol blue) 加 1g 水溶性钠型溴酚蓝于 100ml 水中,搅拌或涡旋混合 直到完全溶解。 1%二甲苯青 FF(xylene cyanole FF) 溶解 1g 二甲苯青 FF 于足量水中,定容到 100ml。 10mg/ml 的溴化乙锭(ethidium bromide) 小心称取 1g 溴化乙锭,转移到广口瓶中,加 100ml 水,用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。 用铝箔包裹装液管,于 4℃贮存。 凝胶上样液(gel loading solutions) 6×碱性凝胶上样液(室温贮存) 成分及终浓度 配制 10ml 溶液各成分用量 0.3 N 氢氧化钠 6 mmol/L EDTA 18%聚蔗糖(400 型) 0.15%溴甲酚绿 0.25%二甲苯青 FF 水 300ul 10N 氢氧化钠 120ul 0.5mol/L EDTA(pH8.0) 1.8g 15mg 25mg 补足到 10ml 6×聚蔗糖凝胶上样液(室温贮存)

成分及终浓度 配制 10ml 溶液各成分用量 0.15%溴酚蓝 0.15%二甲苯青 FF 5 mmol/L EDTA 15%聚蔗糖(400 型) 水 1.5ml 1%溴酚蓝 1.5ml 1%二甲苯青 FF 100ul 0.5mol/L EDTA(pH8.0) 1.5g 补足到 10ml 6×溴酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液(室温贮存) 成分及终浓度 配制 10ml 溶液各成分用量 0.25%溴酚蓝 0.25%二甲苯青 FF 15%聚蔗糖(400 型) 水 2.5ml 1%溴酚蓝 2.5ml 1%二甲苯青 FF 1.5g 补足到 10ml 6×甘油凝胶上样液(4℃贮存) 成分及终浓度 配制 10ml 溶液各成分用量 0.15%溴酚蓝 0.15%二甲苯青 FF 5 mmol/L EDTA 50%甘油 水 1.5ml 1%溴酚蓝 1.5ml 1%二甲苯青 FF 100ul 0.5mol/L EDTA(pH8.0) 3ml 3.9ml 6×蔗糖凝胶上样液(室温贮存) 成分及终浓度 配制 10ml 溶液各成分用量 0.15%溴酚蓝 0.15%二甲苯青 FF 5 mmol/L EDTA 40%聚蔗糖 水 1.5ml 1%溴酚蓝 1.5ml 1%二甲苯青 FF 100ul 0.5mol/L EDTA(pH8.0) 4g 补足到 10ml 10×十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液(室温贮存) 成分及终浓度 配制 10ml 溶液各成分用量 0.2%溴酚蓝

0.2%二甲苯青 FF 200 mmol/L EDTA 0.1%SDS 50%甘油 水 20mg 20mg 4ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0) 100ul 10% SDS 5ml 补足到 10ml happyboy2100 (站内联系 TA) 三.常用培养基 LB 培养基 将下列组分溶解在 0.9L 水中: 蛋白胨 10g 酵母提取物 5g 氯化钠 10g 如果需要用 1N NaOH(~1ml)调整 pH 至 7.0,再补足水至 1L。注:琼脂平板需添加琼脂粉 12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉 7g/L。 SOB 培养基 将下列组分溶解在 0.9L 水中: 蛋白胨 20g 酵母提取物 5g 氯化钠 0.5g 1 mol/L 氯化钾 2.5ml 用水补足体积到 1L。分成 100ml 的小份,高压灭菌。培养基冷却到室温后,再在每 100ml 的小份中加 1ml 灭过菌的 1mol/L 氯化镁。 SOC 培养基 成分、方法同 SOB 培养基的配制,只是在培养基冷却到室温后,除了在每 100ml 的小份中 加 1ml 灭过菌的 1mol/L 氯化镁外,再加 2ml 灭菌的 1mol/L 葡萄糖(18g 葡萄糖溶于足够水 中,再用水补足到 100ml,用 0.22um 的滤膜过滤除菌) 。 TB 培养基 将下列组分溶解在 0.9L 水中: 蛋白胨 12g 酵母提取物 24g 甘油 4ml 各组分溶解后高压灭菌。冷却到 60℃,再加 100ml 灭菌的 170mmol/L KH2PO4/0.72 mol/L K2HPO4 的溶液(2.31g 的 KH2PO4 和 12.54gK2HPO4 溶在足量的水中,使终体积为 100ml。 高压灭菌或用 0.22um 的滤膜过滤除菌) 。 2×YT 培养基 将下列组分溶解在 0.9L 水中: 蛋白胨 16g 酵母提取物 10g 氯化钠 4ml

如果需要用 1N NaOH(~1ml)调整 pH 至 7.0,再补足水至 1L。注:琼脂平板需添加琼脂粉 12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉 7g/L。 YPD 培养基 将下列组分溶解在 0.9L 水中: 蛋白胨 20g 酵母提取物 10g 葡萄糖 20g 用水补足体积为 1L 后,高压灭菌。建议在高压灭菌之前,对色氨酸营养缺陷型每升培养基 添加 1.6g 色氨酸,因为 YPD 培养基是色氨酸限制型培养基。为了配制平板,需要在高压灭 菌前加入 20g 琼脂粉。 四.常用抗生素 氨苄青霉素(ampicillin) (100mg/ml) 溶解 1g 氨苄青霉素钠盐于足量的水中,最后定容至 10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以 25ug/ml~50ug/ml 的终浓度添加于生长培养基。 羧苄青霉素(carbenicillin) (50mg/ml) 溶解 0.5g 羧苄青霉素二钠盐于足量的水中,最后定容至 10ml。分装成小份于-20℃贮存。常 以 25ug/ml~50ug/ml 的终浓度添加于生长培养基。 甲氧西林(methicillin) (100mg/ml) 溶解 1g 甲氧西林钠于足量的水中,最后定容至 10ml 。分装成小份于 -20 ℃贮存。常以 37.5ug/ml 终浓度与 100ug/ml 氨苄青霉素一起添加于生长培养基。 卡那霉素(kanamycin) (10mg/ml) 溶解 100mg 卡那霉素于足量的水中,最后定容至 10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以 10ug/ml~50ug/ml 的终浓度添加于生长培养基。 氯霉素(chloramphenicol) (25mg/ml) 溶解 250mg 氯霉素足量的无水乙醇中,最后定容至 10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以 12.5ug/ml~25ug/ml 的终浓度添加于生长培养基。 链霉素(streptomycin) (50mg/ml) 溶解 0.5g 链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中,最后定容至 10ml。分装成小份于-20℃贮存。 常以 10ug/ml~50ug/ml 的终浓度添加于生长培养基。 萘啶酮酸(nalidixic acid) (5mg/ml) 溶解 50mg 萘啶酮酸钠盐于足量的水中,最后定容至 10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以 15ug/ml 的终浓度添加于生长培养基。 四环素(tetracyyline) (10mg/ml) 溶解 100mg 四环素盐酸盐于足量的水中, 或者将无碱的四环素溶于无水乙醇, 定容至 10ml。 分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光,于-20℃贮存。常以 10ug/ml~50ug/ml 的终浓 度添加于生长培养基。 几种溶液的配制方法 1、PBS: 取 ZLI-9061 PBS 溶于 1000ml 的蒸馏水中,混匀,测 pH 值应在 7.2~7.4 之间,若偏离 此范围,请用 0.1N 的 HCL 或 NaOH 调整。 2、TBS: 2.1 Tris 缓冲液配方: (0.5 M pH7.6) Tris(三羟甲基氨基甲烷) 60.57g 1N HCL 约 420ml

双蒸水 加至 1000ml Tris 缓冲液配制方法:先以少量双蒸水(300~500ml)溶解 Tris,加入 HCl 后,用 HCl (1N)或 NaOH(1N)将 pH 调至 7.6, 最后双蒸水加至 1000ml。此液为储备液,4℃冰箱 中保存。 2.2 TBS 配方: Tris-HCI 缓冲液(0.5M pH7.6) 100ml NaCI 8.5~9g (0.15mol/L) 双蒸水 加至 1000ml TBS 配制方法:先以少量双蒸水溶解 NaCl,再加入 Tris-HCl 缓冲液,最后加双蒸水至 1000ml,充分摇匀。 3、柠檬酸盐缓冲液(Citrate buffer) : 3.1 储存液: A. 0.1M 柠檬酸溶液:称取 21.01g 柠檬酸(C6H8O7?H20)溶于 1000ml 蒸馏水中。 B. 0.1M 柠檬酸钠溶液:称取 29.41g 柠檬酸钠(C6H5Na3O7?2H20)溶于 1000ml 蒸馏 水中。 3.2 工作液: 取 9ml A 液和 41ml B 液加入 450ml 蒸馏水中,溶液 pH 值应为 6.0?0.1 4、胰酶(Trypsin) : 4.1 ZLI-9011 胰蛋白酶消化液: 常用浓度为 0.125%,即使用前将一滴试剂 1 胰酶溶液和三滴试剂 2 胰酶稀释液均匀 混合(1:3 稀释) ,则可直接滴加使用。胰酶的最终浓度可以根据使用者的要求进行调整,浓 度范围可以从 0.05%(1:10 稀释)至 0.25%(1:1 稀释) 。 4.2 ZLI-9010 胰蛋白酶: 取 0.05g 或 0.1g 胰蛋白酶加入到 100ml 0.05%或 0.1% pH7.8 的无水氯化钙水溶液中, 溶解即可。 5、胃酶(Pepsin) : 4%胃蛋白酶,用 0.1mol/L HCL 配制。 (我公司备有 ZLI-9013 胃蛋白酶消化工作液,不需稀释直接滴加使用,欢迎选购) 6、DAB: 6.1 ZLI-9032/9033 DAB Kit: 使用前只需将试剂盒提供的 A、B、C 三种试剂各一滴加至 1ml 双蒸水中,即可获得 1ml DAB 工作液,简单易用。 6.1 ZLI-9030 DAB: 6mgDAB 溶于 10mlTBS(0.05M pH7.6) ,再加入 0.1ml 浓度为 3%的 H2O2,过滤掉沉 淀物,即可。 7、AEC: 4mg AEC 溶于 1ml 二甲基甲酰胺中,加入 14ml 浓度为 0.1M 的醋酸缓冲液(pH5.2) ,然后加 入 0.15ml 3%H2O2,过滤掉沉淀物。 8、RIPA: 1×PBS,1%NP 40,0.5 sodium deoxycholate,0.1% SDS(此液体可长期保存) 。以下抑制剂以 储存液方式保存,临用前加入 RIPA 中。 8.1 10mg/ml PMSF 异丙醇溶液(用量为 10?l/ml) 8.2 Aprotinin(Sigma 产品,用量为 30?l/ml) 8.3 1000mM sodium orthovanadate 冷冻液

(用量为 10?l/ml) 9、Blotto A: 常规使用 1×PBS,5% milk,0.05% Tween 20。 10、Blotto B: 与 Phosphotyrosine 抗体共用,1×PBS,1% milk,0.05% Tween 20。部分实验中 milk 可完全去 除,但可能引起背景增高。



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